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石磊:快速檢測(cè)方法是轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的大方向

[2015/4/11]

  2015年4月9日“第八屆中國國際食品安全技術(shù)論壇”(以下簡(jiǎn)稱:CBIFS 2015)在揚(yáng)州市揚(yáng)州會(huì)議中心開幕。論壇開幕式的當(dāng)天同時(shí)舉辦了四個(gè)專題技術(shù)研討會(huì),分別是:食品安全分析檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)、食品安全快速檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)、食品中微生物及毒素檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)、農(nóng)獸藥殘留及重金屬檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)。

  在食品安全快速檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)中,來自華南理工大學(xué)輕工與食品學(xué)院的石磊教授做了題為“新型快速轉(zhuǎn)基因檢測(cè)方法在食品中的應(yīng)用”的主題報(bào)告。

  石磊在報(bào)告中首先按照檢測(cè)對(duì)象對(duì)食品轉(zhuǎn)基因方法進(jìn)行了分類,一種是核酸檢測(cè),其主要采用普通PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、巢氏PCR、競(jìng)爭(zhēng)性PCR、基因芯片技術(shù);另一種是蛋白質(zhì)檢測(cè),主要采用的是ELISA、免疫試紙條、Westem印記技術(shù)。石磊題道,國外許多政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)都在大量使用快速檢測(cè)方法,尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和顯色培養(yǎng)基法,這些快速檢測(cè)方法在國外應(yīng)用相當(dāng)成功。國內(nèi)的許多政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)也都已經(jīng)在使用或正在考慮使用國外先進(jìn)的快速檢測(cè)技術(shù)。石磊說,從長遠(yuǎn)發(fā)展趨勢(shì)來說,快速方法是轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的大方向。

  石磊在報(bào)告中介紹了目前常用的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)方法,如膠體金免疫層析檢測(cè)條、PCR—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、熒光PCR技術(shù)等。他說,熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)是目前主流的分子檢測(cè)技術(shù),相關(guān)產(chǎn)品占據(jù)全球分子診斷市場(chǎng)的一半。然而這種技術(shù) 由于核酸檢測(cè)過程復(fù)雜、實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增信號(hào)檢測(cè)設(shè)備價(jià)格高、對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件條件要求高等問題,只局限于高端市場(chǎng),普及推廣困難,基層醫(yī)療和檢測(cè)機(jī)構(gòu)需求得不到滿足。

  基于此種現(xiàn)狀,石磊及其團(tuán)隊(duì)開發(fā)了新型恒溫?zé)晒夂怂釘U(kuò)增分子檢測(cè)平臺(tái)。據(jù)石磊介紹說,該平臺(tái)的反應(yīng)原理是一種新型的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),即等溫多自配引發(fā)擴(kuò)增(IMSA),反應(yīng)體系是具有鏈置換特性的DNA聚合酶、dNTP、適宜的緩沖液和模板DNA,能夠識(shí)別靶DNA7個(gè)特異序列的6條引物。他說,該方法特異性強(qiáng),6條引物對(duì)靶序列的7個(gè)特異序列區(qū)的識(shí)別保證了IMSA擴(kuò)增的高特異性;且等溫高效,IMSA在等溫條件下擴(kuò)增,不會(huì)因?yàn)闇囟雀淖兌斐蓵r(shí)間的損失,而且受非靶序列的影響小,與PCR相比,其檢測(cè)極限更小,僅為幾個(gè)拷貝;谶@些優(yōu)點(diǎn),IMSA在1小時(shí)可完成檢測(cè),核酸染料后,肉眼就可觀察結(jié)果且反應(yīng)不需PCR儀和特殊試劑。

  石磊介紹說,IMSA技術(shù)已經(jīng)成功產(chǎn)業(yè)化。目前,一臺(tái)恒溫?zé)晒鈾z測(cè)儀、搭配一臺(tái)金屬浴、一臺(tái)混勻器、一臺(tái)小型離心機(jī)及移液器和檢測(cè)試劑盒即可成為一套可移動(dòng)的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。